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大肠杆菌、毕赤酵母外源蛋白表达优化

常规基因工程蛋白表达是将植物、动物、微生物等的目的基因插入合适载体后导入大肠杆菌或毕赤酵母表达出大量目的蛋白。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。
大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下优点:易于生长和控制;易于培养,实验耗费少;可选择多种大肠杆菌菌株及与之匹配的各种特性的质粒。原核蛋白表达系统是迄今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统。毕赤酵母相对大肠杆菌的优点在于:分泌表达效果好;可对目标蛋白进行糖基化修饰;内源内毒素很少。

我公司提供一站式服务,或者其中几个步骤的服务:
1 、 工程蛋白表达优化

我公司提供大肠杆菌和毕赤酵母的蛋白表达优化技术服务。 目前可进行的优化因素为: 1) 诱导剂种类、浓度和诱导时机、时长的选择、pH、溶氧、温度等。 2) 菌种和质粒稳定性的考察 。

2 、 蛋白质纯化

客户提供含有相应目标产物的溶液,也可以是相应可生产目标产物的菌种(限于大肠杆菌和毕赤酵母),视客户需要,可提供纯化后的样品,也可提供提纯的工艺。

3 、 小量表达评估

摇瓶培养重组细菌,诱导表达目标蛋白,通过多种层析方法纯化表达的重组蛋白。若工程蛋白设计有纯化标签,可按您要求利用蛋白酶切除标签,再纯化获得所需的目标蛋白。通过SDS-PAGE电泳与WB控制每一步的结果和验证目标蛋白的正确性。

4 、 大规模蛋白制备(发酵罐发酵)

依据小试结果,开发大规模菌种发酵及后续蛋白提纯工艺;也可根据客户工艺直接进行。提供客户合格的大量目标蛋白和检测报告,若您需要也可提供工艺。

5 、 蛋白复性

利用不同复性缓冲液的体系,对目标蛋白进行小量复性试验提供复性后样品供客户检测。 可根据客户要求,按照其中一种样品的复性条件制备小量的复性蛋白。我公司可提供具体的复性缓冲液配方及复性工艺。

项目管理能推动项目进程的跟踪,理顺项目流程和文件归档,使研发、物流和财务部门顺畅协作。项目管理团队利用深厚的生物学知识和项目经验调动各方资源,实施宏观管理。

我们为您提供从分子到细胞的一站式实验技术服务,最大限度的节约时间和降低成本,而且使结果更准确可靠。